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蘭伯艾克斯|細胞培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題

更新時間:2023-08-23      點擊次數(shù):695


培養(yǎng)基為什么偏紫色

為了方便觀察和感知培養(yǎng)液的狀況,我們可以在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。酚紅指示劑對于pH值在6-8范圍內(nèi)非常敏感,呈現(xiàn)出從黃色到紫紅色的變化。當培養(yǎng)液偏酸時,酚紅會呈現(xiàn)偏黃色;而當培養(yǎng)液偏堿性時,酚紅會呈現(xiàn)偏紫色。


通常情況下,當培養(yǎng)液變成黃色時,這可能是由于細菌或細胞過度增長,產(chǎn)生了酸性物質(zhì)。而當培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中,二氧化碳會逐漸溢出,導(dǎo)致pH偏堿性,從而使培養(yǎng)基呈現(xiàn)偏紫色。對于呈現(xiàn)偏紫色的培養(yǎng)基,我們可以通過通入經(jīng)無菌過濾的二氧化碳來調(diào)整pH值后繼續(xù)使用。


然而,長時間未使用完的堿性培養(yǎng)基不建議繼續(xù)使用,因為它可能導(dǎo)致細胞生長停滯或死亡。以上是針對培養(yǎng)液顏色變化的一些解釋和建議。根據(jù)具體情況,可能需要進一步調(diào)整和優(yōu)化處理方法。


細胞培養(yǎng)的注意問題

1. 在細胞培養(yǎng)液中加入HEPES可以穩(wěn)定液體的pH值。HEPES的全稱是N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid,它是一種氫離子緩沖劑,可以在較長時間內(nèi)維持恒定的pH范圍。HEPES對細胞沒有毒性作用,一般的細胞培養(yǎng)液中含有20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。


2. 使用培養(yǎng)基顏色變化作為換液的指標是一個實用但不準確的方法。在培養(yǎng)液中加入了指示劑酚紅,液體的顏色變化可以間接提示細胞生長的狀態(tài)。當細胞生長旺盛時,會產(chǎn)生酸性物質(zhì),導(dǎo)致液體呈黃色;相反,液體會呈紫紅色。但是,僅憑顏色變化來判斷細胞生長狀態(tài)是不夠的,還需要結(jié)合其他指標進行細胞觀察和評估。


3. pH值變化大會對細胞產(chǎn)生傷害,不利于細胞生長。


4. 不是所有的細胞培養(yǎng)基都適用相同的CO2濃度。CO2濃度的選擇取決于培養(yǎng)基中NaHCO3的濃度。CO2和溶液中的HCO3-形成緩沖體系,使整個培養(yǎng)體系的pH值維持在弱堿性(約為7)。當培養(yǎng)基暴露在空氣中時,HCO3-會迅速分解,導(dǎo)致pH值快速升高,從紅色變?yōu)樽仙?。當將培養(yǎng)基放入細胞培養(yǎng)箱中,在CO2的作用下,pH值會緩慢地從紫色變回紅色。


不同細胞培養(yǎng)基的NaHCO3濃度不同,使用不同細胞培養(yǎng)基時應(yīng)選擇相應(yīng)的CO2濃度。具體選擇的CO2濃度如下:


當NaHCO3濃度<1.5g/L時,所需CO2濃度為4%;當NaHCO3濃度處于1.5-2.2g/L之間時,所需CO2濃度為5%;


當NaHCO3濃度處于2.2-3.4g/L之間時,所需CO2濃度為7%;


當NaHCO3濃度>3.5g/L時,所需CO2濃度為10%。



當我們發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液的pH值在細胞不斷生長過程中發(fā)生異常變化時,我們應(yīng)該采取以下措施:



1. 檢查二氧化碳濃度是否適當:根據(jù)培養(yǎng)基中的碳酸氫鈉濃度,調(diào)整培養(yǎng)箱中二氧化碳的百分比。對于2.0至3.7 g/L的碳酸氫鈉,使用5-10%的二氧化碳濃度。或者考慮使用不依賴二氧化碳的培養(yǎng)基。


2. 檢查培養(yǎng)瓶蓋是否太緊:將瓶蓋松開1/4圈。


3. 確保碳酸氫鹽緩沖充分:加入HEPES緩沖液,使最終濃度達到10-25 mM。


4. 檢查培養(yǎng)基中的鹽是否正確:在CO2條件下使用Earle's鹽培養(yǎng)基,在常氣環(huán)境下使用Hanks'鹽培養(yǎng)基。


5. 檢查是否有細菌、酵母或真菌污染:將培養(yǎng)物和培養(yǎng)基丟棄,嘗試去除污染的培養(yǎng)物。以上是處理培養(yǎng)液pH異常變化的一些常見方法,根據(jù)具體情況,可能需要進一步調(diào)整和優(yōu)化處理方法。



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